Avtor: Ju. A. Shushkevich,
OOO «Kubanskijj soevyjj koncentrat»
Samyjj ehffektivnyjj metod
1. Vvedenie v problematiku
Reshenie problemy deficita belka — odnojj iz global'nykh problem, stojashhikh pered chelovechestvom, — nevozmozhno bez ispol'zovanija syr'evykh resursov rastitel'nogo proiskhozhdenija, prezhde vsego poluchaemykh pri pererabotke semjan maslichnykh i zernobobovykh kul'tur. V ehtom kontekste belkam soi tradicionno otvodilas' vedushhaja rol'. Vysokoe soderzhanie ipishhevaja cennost' soevogo belka pri razvitykh tekhnologijakh vysokobelkovykh produktov — soevojj muki, koncentratov i izoljatov — obespechili ikh shirokoe ispol'zovanie v pishhevojj promyshlennosti i v pitanii naselenija. V 2005 godu mirovoe potreblenie soevogo izoljata sostavljalo 350 tys. tonn, soevogo koncentrata 500 tys. tonn[1]. Po prognozu LMC International Ltd., odnojj iz vedushhikh britano-amerikanskikh konsaltingovykh kompanijj v oblasti pishhevojj promyshlennosti i sel'skokhozjajjstvennykh rynkov, k 2020 godu mirovojj rynok soevykh izoljatov vyrastet do 1,6 mln. tonn, soevykh koncentratov — do 5,6 mln. tonn. Prognoziruetsja, chto do poloviny rynka kazeina i kazeinatov i chast' rynka syvorotochnykh belkov moloka mozhet byt' zameshhena soevymi belkovymi produktami[2].
Soevye belki pishhevogo kachestva imejut razlichnoe naznachenie. Tak, dlja vospolnenija deficita belkov zhivotnogo proiskhozhdenija, problema kotorogo osobenno ostro stoit v razvivajushhikhsja stranakh, dostatochno ispol'zovanie soevojj muki, koncentrata i izoljata, proizvodimykh po klassicheskim tekhnologijam, izvestnym s serediny XX veka. V to zhe vremja dlja udovletvorenija sprosa na belkovye ingredienty s razvitymi funkcional'no-tekhnologicheskimi svojjstvami i uluchshennymi mediko-biologicheskimi kharakteristikami, neobkhodimy novye tekhnologicheskie reshenija. V poslednie 10-15 let byli issledovany i podtverzhdeny profilakticheskie i lechebnye svojjstva soevykh peptidov, flavonoidov, oligosakharidov i drugikh fitokhimicheskikh soedinenijj, soderzhashhikhsja v semenakh soi i produktakh ikh pererabotki. V svjazis ehtimna povestku dnja vstal vopros ob aktivizacii sootvetstvujushhikh biologicheski aktivnykh faktorov v massovo vypuskaemykh belkovykh produktakh, o povyshenii ikh specifichnosti i o sozdanii promyshlennykh tekhnologijj ikh izvlechenija, ochistki i koncentrirovanija.
2. Strukturnaja modifikacija belkov
Odnim iz perspektivnykh i ehkonomicheski ehffektivnykh napravlenijj razvitija i uluchshenija kharakteristik pishhevykh belkov javljaetsja ikh strukturnaja modifikacija.
Pervye upominanija o strukturnojj modifikacii soevykh belkov otnosjatsja k 1940-m godam, kogda v SShA velis' issledovanija po polucheniju ustojjchivykh k nagrevaniju penoobrazovatelejj dlja voenno-morskogo flota. Dlja ehtogo ispol'zovalsja fermentativnyjj gidroliz soevojj muki pri nizkikh znachenijakh pH (2.0-3.5), v rezul'tate kotorogo obrazovyvalis' polipeptidy s molekuljarnojj massojj ne menee 14000 Da. Do pojavlenija sinteticheskikh poverkhnostno-aktivnykh veshhestv «bobovyjj sup» schitalsja luchshim penoobrazovatelem po pokazateljam sily vspenivanija i ustojjchivost'ju protiv osedanijav uslovijakh vysokojj temperatury[3].
Na segodnjashnijj den' pod strukturnojj modifikaciejj belkovykh soedinenijj soi mozhno ponimat' poluchenie v processe upravljaemojj destrukcii i/ili napravlennojj khimicheskojj, fermentativnojj ili fizicheskojj modifikacii iskhodnykh biopolimerov soevogo belka ili produktov ikh gidroliza novykh belkovykh proizvodnykh, v tom chisle bolee nizkomolekuljarnykh belkov i polipeptidov s uluchshennymi ili principial'no novymi funkcional'nymi i mediko-biologicheskimi svojjstvami i s izmenennymi fiziko-khimicheskimi kharakteristikami.
Termin «strukturnaja modifikacija belkovykh soedinenijj» v otechestvennykh nauchnykh publikacijakh po sostojaniju na segodnjashnijj den' vstrechaetsja poka chto dostatochno redko,obychno ispol'zujutsja bolee obshhee opredelenie «modifikacija belkov» ili, kak chastnyjj sluchajj, «gidroliz belkov», v to vremja kak v zarubezhnojj nauchnojj literature termin «structural modification ofprotein» shiroko rasprostranen[4].
Strukturnye kharakteristiki soevykh belkov dovol'no khorosho izucheny[5]. Soevye belki mozhno razdelit' na gruppy polipeptidov, razlichajushhikhsja po molekuljarnojj masse. V zavisimosti ot skorosti sedimentacii oni uslovno podrazdeljajutsja na 2S, 7S, 11S i 15S frakcii. V svoju ochered', kazhdaja frakcija javljaetsja slozhnojj smes'ju belkov, razlichajushhikhsja po svoim kharakteristikam.
Osnovnymi frakcijami, opredeljajushhimi funkcional'nost' soevogo belka, javljajutsja 7S v- i g-konglicininy (M.m. 150-175 kD) i 11S-gicinin (M.m. 320-350 kD), na dolju kotorykh prikhoditsja bolee 80% summarnykh belkov.
Pri ehlektroforeze po Laemli glicinin i konglicininy raspadajutsja na otdel'nye polipeptidy:
- v-konglicinin: b’ — 80 kD, b — 76 kD, v — 50 kD;
- g-konglicinin: 66-65 kD;
- glicinin: kislye sub"edinicy — 45-37 kD, osnovnye sub"edinicy — 22-19 kD.
V kachestve osnovnogo instrumenta upravljaemojj destrukcii globulinov soi ispol'zuetsja fermentativnyjj gidroliz, kotoryjj mozhet byt' dopolnen membrannojj fil'traciejj[6], gomogenizaciejj,ehmul'sionnojj ehkstrakciejj[7], izoehlektricheskim fokusirovaniem i promyshlennojj zhidkostnojj khromatografiejj[8]. V rjade sluchaev strukturnaja modifikacija mozhet osushhestvljat'sja posredstvom reakcijj plasteinovogo sinteza, pozvoljajushhimi izmenit' funkcional'nye svojjstva ili uluchshit' aminokislotnyjj sostav produkta (naprimer, povysit' soderzhanie odnojj ili neskol'kikh aminokislot, udalit' «gor'kie» aminokisloty)[9]. Zavershajushhejj stadiejj tekhnologicheskogo processa (esli produkt ne realizuetsja v zhidkom vide) javljaetsja raspylitel'naja sushka produkta pri special'nykhtemperaturnykh rezhimakh.
Strukturnaja modifikacija predpolagaet sushhestvennoe izmenenie fizicheskikh i khimicheskikh kharakteristik belka, raskrytie ili formirovanie novykh svojjstv. Nizhe privoditsja kratkaja kharakteristika togo, kak i kakim obrazom primenjaemye pri strukturnojj modifikacii metody vlijajut na svojjstva konechnykh produktov.
Pri gidrolize kak takovom proiskhodit ukorachivanie molekul otdel'nykh polipeptidov, vysvobozhdenie i aktivacija novykh khimicheskikh svjazejj, v chastnosti, SH-svjazejj i t.d., «vysvobozhdenie» ili ehksponirovanie na poverkhnost' otdel'nykh gidrofil'nykh ili gidrofobnykh grupp, v rezul'tate chego poluchaemye soedinenija obladajut novymi, otlichnymi ot iskhodnogo substrata, svojjstvami rastvorimosti, zhiroehmul'giruemosti,vlago- i zhirouderzhanija, antioksidantnymi svojjstvami, reologicheskimi kharakteristikami.
Poluchaemye v processe strukturnojj modifikacii peptidy i polipeptidy klassificirujutsja v nanodiapazone ot 5 do 100 nm.
Vysokaja substratnaja specifichnost' primenjaemykh pri gidrolize ehnzimov pozvoljaet napravlenno vesti reakcii po strogo opredelennym svjazjam, dobivajas' poluchenija opredelennykh grupp peptidov i polipeptidov, kotorye v posledujushhem mogut byt' otseparirovany s neobkhodimojj stepen'ju chistoty.
Krome togo, narjadu s reakcijami gidroliza pri ispol'zovanii nekotorykh fermentov mogut katalizirovat'sjai reakcii sshivanija belkov poperechnymi svjazjami — tak, v processe gidroliza, kataliziruemogo transglutaminazojj,obrazujushhiesja «sshivki» mezhdu ostatkami lizina i glutamina v polipeptidnojj cepi usilivajut zhelirujushhie svojjstva i mogut byt' ispol'zovany dlja izgotovlenija mikrokapsul dlja immobilizovannykh fermentov[10].
Ispol'zovanie pri gidrolize shhelochnykh reagentov pozvoljaet poluchat' proteinaty, naibolee rasprostranennymi sredi kotorykh javljajutsja proteinaty natrija, kal'cija i kalija; kotorye obladajutraznymi funkcional'nymi svojjstvami. V rabote L. V. Gaponovojj bylo pokazano, chto zhirouderzhivajushhaja i vodouderzhivajushhaja sposobnosti maksimal'ny u soevykh proteinatov kalija, penoobrazujushhaja sposobnost' — u proteinata natrija, zhiroehmul'girujushhaja sposobnost' — u soevykh proteinatov kal'cija.[11] To est' imeet mesto vyrazhennoe vlijanie kationov shhelochnykh i shhelochnozemel'nykh metallov na funkcional'nye svojjstva proteinatov soevogo belka.
Izvestno,chto konformacija belka vlijaet na ego fiziko-khimicheskie svojjstva. Konformacija belka chuvstvitel'nak osobennostjam aminokislotnojj posledovatel'nosti i kharakteristikam rastvoritelja. Svorachivanie polipeptida pri formirovanii prostranstvennojj struktury opredeljaetsja termodinamicheskimi faktorami.Dlja vodorastvorimykh belkov bol'shinstvo nepoljarnykh ostatkov nakhoditsja vnutri, a bol'shinstvo poljarnykh ostatkov na poverkhnosti globuly, nakhodjashhejjsja v kontakte s rastvoritelem. Ehtim dostigaetsja minimizacija svobodnojj ehnergii belkovojj strukturypri dannykh uslovijakh i svojjstvakh rastvora. V obshhem sluchae, v globuljarnykh belkakh gidrofobnye ostatki nakhodjatsja vnutri, a gidrofil'nye bol'shejj chast'ju na poverkhnosti. Poehtomu nativnye globuljarnye belki obychno obladajut vysokojj rastvorimost'ju. V processe promyshlennogo poluchenija ochishhennykh frakcijj belkov v rezul'tate denaturacii v belke proiskhodjat strukturnye izmenenija, privodjashhie k snizheniju egorastvorimosti i izmeneniju funkcional'nosti. Tak, nagrevanie belkovykh rastvorov privodit k uvelicheniju doli gidrofobnykh uchastkov na poverkhnosti[12].V processe gidroliza i fizicheskikh vozdejjstvijj — sdvigovykh deformacijj pri gomogenizacii — proiskhodit izmenenie prostranstvennojj struktury s uvelicheniem udel'nojj konformacionnojj ehnergii belkovykh chastic. V rezul'tate ehtikh processov nepoljarnyegidrofil'nye ostatki (R-gruppy serina, treonina, tirozina, cisteina, glicina i dr.) okazyvajutsja v bol'shejj stepeni ehksponirovannymi na poverkhnost', chto povyshaet rastvorimost'[13] ehtikh chastic. Obrazovanie belkovykh chastic s preobladaniem gidrofobnykh R-grupp (alanina, lejjcina, izolejjcina, valina i prolina), pozvoljaet poluchat' frakcii s povyshennymi zhiroehmul'girujushhimi kharakteristikami. Otmetim takzhe, chto po dannym tajjvanskikh uchenykh dazhe bez dorogostojashhego razdelenija po preobladajushhim aminokislotnym ostatkam koncentrat soevykh peptidov javljaetsja prevoskhodnym ehmul'gatorom i mozhet byt' ehmul'girovan s vodojj i zhirom v sootnoshenii 1:7:1 s sokhraneniem stabil'nojj ehmul'sii, tem samym polnost'ju zamenjaja lecitin v kachestve ehmul'gatora[14]. Inymi slovami, poluchaemyjj produkt s nanochasticami belka oboikh tipov mozhet sbalansirovano obladat' kak svojjstvom rastvorimosti, tak i javljat'sja ehmul'gatorom.
Uzhe upominavshiesja sdvigovye deformacii v processe gomogenizacii pri vysokom davlenii ne tol'ko fizicheski obespechivajut destrukciju belkovykh globul napolipeptidnye fragmenty, no i sposobstvujut ikh stabilizacii i snizheniju agregirovanija.Imejutsja svedenija, chto v rezul'tate fizicheskogo vozdejjstvija sdvigovykh deformacijj pri gomogenizacii na poverkhnosti belkovykh chastic ehksponirujutsja SH-gruppy cisteina, obespechivajushhie vyrazhennyjj antioksidantnyjj ehffekt produkta (SH-gruppy vystupajut kak konkurirujushhie s drugimi substratami ob"ekty okislenija, kotorye ne dajut svobodnykh radikalov i fakticheski gasjat cepnuju reakciju svobodnoradikal'nogo okislenija[15]).
Blagodarjaumen'sheniju molekuljarnojj massy poluchaemykh belkovykh chastic znachitel'no vozrastaet ikh termostabil'nost', povyshaetsja ustojjchivost' k ionnojj sile rastvora (koncentracii soli).
Takim obrazom, pri provedenii strukturnojj modifikacii belkov vozmozhno primenenie shirokogo nabora biotekhnologicheskikh, khimicheskikh i fizicheskikh metodov vozdejjstvija,a takzhe metodov vydelenija, ochistki i koncentrirovanija, pozvoljajushhikh poluchat' veshhestva s zadannymi kharakteristikami kak v smesevykh sistemakh, tak v vide substancijj s neobkhodimym urovnem chistoty.
Neobkhodimo otmetit', chto v literature takzhe upominaetsja ob ehksperimente, provedennom tajjvan'skimi uchenymi po polucheniju nanochastic soevogo belka s razmerami menee 100 nm putem sverkhskorostnogo mekhanicheskogo razmola neposredstvenno soevykh bobov. Pri ehtom poluchennye nanochasticy soevogo belka, svobodnye ot polisakharidov i fosfolipidov, obladali povyshennojj biologicheskojj aktivnost'ju, v chastnosti, sposobstvovali povysheniju immunnogo statusa u laboratornykh myshejj[16]. Po-vidimomu, vsjakijj sposob«vysvobozhdenija» peptidov soi vne zavisimosti ot primenjaemojj dlja ehtogo tekhnologii obespechivaet poluchenie produktov s vyrazhennym projavleniem novykh khimicheskikh i biologicheskikh svojjstv. Tajjvan'skie issledovateli nichego ne soobshhajut o stoimosti nanochastic soevogo belka, poluchennykh pri mekhanicheskom razmole, no, sudja po vsemu, stoimost' takojj tekhnologii na porjadok prevoskhodit stoimost' gidroliznogo processa. Uchityvaja stremitel'noe razvitie biotekhnologii i pojavlenie na rynke vse bol'shego kolichestva fermentnykh preparatov s vysokojj substratnojj specifichnost'ju i aktivnost'ju, process strukturnojj modifikacii na osnove gidroliza javljaetsja na segodnjashnijj den' naibolee ehkonomicheski perspektivnym.
3. Vozmozhnosti strukturnojj modifikacii v formirovanii novykh funkcional'nykh svojjstv produktov
Vyshe byl dan analiz sistemy vozdejjstvijj, kotorye mogut primenjat'sja v processe strukturnojj modifikacii belkov soi. Ehti vozdejjstvija pozvoljajut upravljat' funkcional'no-tekhnologicheskimi i mediko-biologicheskimi svojjstvami konechnykh produktov.
Nizhe v tablice privoditsja perechen' tekhnologicheskikh vozdejjstvijj, neobkhodimykh dlja dostizhenija zadannykh svojjstv produktov v processe strukturnojj modifikacii belkov soi
Svojjstva | Tekhnologicheskie vozdejjstvija, primenjaemye dlja dostizhenija svojjstva |
---|---|
Strukturnaja modifikacija belkov osushhestvljaetsja na urovne izmenenijj svojjstv chastic... | |
Rastvorimost' v vode | Gidroliz, kataliziruemyjj fermentamiSdvigovye deformacii v processe gomogenizacii pri vysokom davlenii |
Uderzhanie zhira i vody v ehmul'sii | Gidroliz + gomogenizacija + separirovanie chastic s gidrofobnymi R-gruppamiili –gidroliz v shhelochnojj srede s obrazovaniem proteinata kalija |
Ehmul'girujushhaja sposobnost' | Gidroliz + gomogenizacija + separirovanie chastic s gidrofobnymi R-gruppamii/ili –gidroliz v shhelochnojj srede |
Povyshennaja antioksidantnaja aktivnost' | Gidroliz s ispol'zovaniem fermentov s substratnojj specifichnost'jupo SH-svjazjam + gomogenizacija (vysvobozhdenie SH-svjazejj) |
Povyshennaja termicheskaja stabil'nost' | Prodolzhitel'nyjj gidroliz s vysokojj stepen'ju gidroliza (DH) |
Ustojjchivost' k soli (NaCl) v pishhevykh prilozhenijakh | Gidroliz s obrazovaniem proteinata natrija |
Ustojjchivost' protiv aglomeracii | Gomogenizacija pri vysokom davlenii |
Maksimizacija soderzhanija specificheskikhpeptidov | Gidroliz s ispol'zovaniem fermentov s zadannojj substatratnojj specifichnost'ju, ul'trafil'tracija |
Maksimizacija soderzhanija svobodnykh aminokislot | Maksimal'no glubokijj gidroliz s DH?100%, ul'trafil'tracija |
Mikrokapsulirovanie belkovykh nanochastic | Ispol'zovanie «sshivajushhikh» reakcijj, kataliziruemykh transglutaminazojj |
Sozdanie belkovykh nanochastic zadannogo sostava | Plasteinovyjj sintez |
Obsuzhdaemaja strukturnaja modifikacija belkov osushhestvljaetsja na urovne izmenenijj svojjstv chastic nanometrovogo masshtaba s ispol'zovaniem raznoobraznykh khimicheskikh, biokhimicheskikh i fizicheskikh metodov.
Poluchaemye fragmenty belkovykh chastic nanorazmernogo masshtaba obladajut svojjstvami, kotorye naprjamuju zavisjat ot ikh razmera i atomarnojj struktury poverkhnosti. To est' dannyjj process otnositsja k oblasti nanotekhnologijj. Pri ehtom, khotja osnovnaja chast' preobrazovanijj osushhestvljaetsja po skheme top-bottom, chast' iz nikh predpolagaet obratnyjj process bottom-top (mikrokapsulirovanie, plasteinovyjj sintez).
Takim obrazom, strukturnaja modifikacija belkov na osnove biokataliza otkryvaet shirokie vozmozhnosti dlja poluchenija veshhestv s zaranee zadannymi upravljaemymi kharakteristikami.
4. NIR po strukturnojj modifikacii, osnovnye avtory i publikacii, vnedrenie
Aktivnaja nauchno-issledovatel'skaja rabota po tematike strukturnojj modifikacii belkov nachalas' v 1970-kh godakh, odnovremenno s issledovanijami po plasteinovomu sintezu, odnako znachitel'naja chast' rabot po dannojj tematike v SSSR byla zasekrechena. Naibolee krupnym zarubezhnym rezul'tatom, poluchivshim shirokoe kommercheskoe primenenie s 1980 goda, stala tekhnologija refoldinga soevogo koncentrata s cel'ju vosstanovlenija ego rastvorimosti v vodnykh rastvorakh (v processe spirtovojj obrabotki, javljajushhejjsja neot"emlemojj chast'ju tekhnologii poluchenija soevogo koncentrata, belok denaturiruet i utrachivaet svojjstvo rastvorimosti). V processe refoldinga strukturnajamodifikacija osushhestvljaetsja v uslovijakh centrobezhnojj gomogenizacii pri povyshennojj temperature v shhelochnykh uslovijakh[17].Dejjstvujushhimi faktorami pri refoldinge vystupajut khimicheskijj gidroliz soevogo globulina v prisutstvii shhelochi i sdvigovye deformacii, dostigaemye pri gomogenizacii, obespechivajushhie intensifikaciju reakcii gidroliza, obespechivajushhee vysvobozhdenie gidrofil'nykh grupp i snizhajushhie aglomeracionnuju sposobnost' chastic gotovogo belka.
V SSSR issledovanija po strukturnojj modifikacii belkovykh soedinenijj rastitel'nogo syr'ja osushhestvljalis' v ramkakh zakrytojj tematiki NIR NPO «Maslozhirprom».Odnojj iz naibolee polnykh nauchnykh publikacijj po dannojj tematike stala dissertacionnaja rabota M.L.Domoroshhenkovojj «Razrabotka tekhnologii poluchenija modificirovannykh belkov iz soevogo shrota s ispol'zovaniem biotekhnologicheskikh metodov» (1991 g.)[18]. V ukazannojj rabote bylo izucheno vlijanie prirody proteaz i stepeni gidroliza na fiziko-khimicheskie i funkcional'nye svojjstva soevykh belkov, issledovany tekhnologicheskie rezhimy processa fermentativnojj modifikacii, issledovany khimicheskie, funkcional'nye i mediko-biologicheskie svojjstva modificirovannykh soevykh belkov.
Byla proslezhena izbiratel'nost' gidroliza otdel'nykh sub"edinic soevykh globulinov pri dejjstvii raznykh proteaz.
Pri dejjstvii shhelochnykh i slaboshhelochnykh proteaz gidrolizu podvergalis' sledujushhie polipeptidy:
- b-, b’-polipeptidy v-konglicinina i g-konglicinin > v-polipeptidy v-konglicinina > kislye peptidy glicinina > osnovnye polipeptidy glicinina
- / KG (7S) > kislye GL (11S) > osnovnye GL (11S) /.
Pri dejjstvii nejjtral'nojj proteazy Bac. Subtilis, obladajushhejj substratnojj specifichnost'ju k gidrofobnym aminokislotam s N-konca rasshhepljaemojj svjazi, chastichnomu rasshhepleniju podverglis' vse polipeptidy.
Pri dejjstvii kislykh proteaz:
- kislye polipeptidy glicinina > b-, b’-polipeptidy v-konglicinina i g-konglicinin > v-polipeptidy v-konglicinina > osnovnye peptidy glicinina
- / kislye GL (11S) > KG (7S) > osnovnye GL (11S) /.
Razlichija v dinamike gidroliza i v polipeptidnykh spektrakh fermentativno modificirovannykh belkov byli obuslovleny raznojj substratnojj specifichnost'ju ispol'zovannykh fermentov i osobennostjami biokhimicheskogo stroenija otdel'nykh sub"edinic soevykh globulinov. Takim obrazom, uzhe v 90-e gody byla pokazana vozmozhnost' napravlennojj destrukcii belkovykh biopolimerov.
K bol'shomu sozhaleniju, v bolee pozdnie gody fundamental'nye i prikladnye nauchno-issledovatel'skie raboty po tematike strukturnojj modifikacii belkovykh soedinenijj v nashejj strane provodilis' ochen' ogranichenno. Iz opublikovannykh rabot otechestvennykh uchenykh po lokal'nym aspektam sootvetstvujushhejj tematiki mozhno, ne pretenduja na polnotu, upomjanut' vypolnennye v GU NII Pitanija RAMN i Moskovskom gosudarstvennom universitete prikladnojj biotekhnologii rabotu po polucheniju i issledovaniju fermentativnogo gidrolizata izoljata soevykh belkov[19], vypolnennoe v Sankt-Peterburgskom gosudarstvennom universitete nizkotemperaturnykh i pishhevykh tekhnologijj issledovanie po tipam khimicheskikh reakcijj, kataliziruemykh mikrobnym fermentnom transglutaminazojj na substratakh, predstavlennykh globulinami soi[20],issledovanie proteoliza syvorotochnykh belkov moloka s primeneniem ehlektroaktivacii, vypolnennye v Severokavkazskom gosudarstvennom tekhnicheskom universitete[21] i nekotorye drugie. Provedenie bolee masshtabnykh NIR v Rossii sderzhivaetsja otsutstviem celevogo gosudarstvennogo finansirovanija i potencial'no zainteresovannykh v ikh rezul'tatakh predprijatijj po glubokojj pererabotke soi i polucheniju syvorotochnykh belkov moloka.
Takim obrazom, tekhnologii strukturnojj modifikacii belkovykh soedinenijj v nashejj strane do sikh por ne vyshli za predely laboratorijj.
V to zhe vremja v zarubezhnykh stranakh dannoe napravlenie aktivno razvivalos'. V 2002-2004 gg nachalos' promyshlennoe proizvodstvo gidrolizatov soevykh belkov na zavodakh po glubokojj pererabotke soi kompanijj ADM (SShA), Solae (SShA) i Solbar (Izrail'). Bol'shuju rol' v nauchno-tekhnologicheskom obespechenii sootvetstvujushhikh proizvodstv sygral izrail'skijj biotekhnolog D.Khajjes (D.Chajuss). V techenie 2005-2008 gg. analogichnye proizvodstva pojavilis' v Kitae i Malajjzii. Proizvodstvo gidrolizatov soevogo belka osushhestvljaet kompanija Fuji Oil (Japonija). Po mneniju specialistov, rabotajushhikh v dannojj oblasti, v nastojashhee vremja mirovojj centr nauchnykh issledovanijj po tematike fermentativnogo gidroliza belkov nakhodjatsja v Japonii, na Tajjvane, a takzhenarashhivaetsja intensivnost' issledovatel'skikh rabot v Kitae i v Juzhnojj Koree[22].
V nachale 2000-kh godov v nauchnojj literature pojavilis' publikacii ob unikal'nykh biologicheski aktivnykh svojjstvakh nizkomolekuljarnogo peptida lunazina, vydelennogo iz semjan soi ili iz soevykh belkov. Lunazin sostoit iz 43 aminokislotnykh ostatkov, imeet molekuljarnuju massu 5.45 ± 0.25 kD i javljaetsja otdel'nojj sub"edinicejj 2S al'bumina. Coderzhanie prirodnogo lunazina v semenakh soi ochen' neznachitel'no, no ego koncentracija rezko vozrastaet v rezul'tate gidroliza belkov[23][24][25].
V 2009 godu amerikanskaja firma Soy Labs, LLC zajavila o nachale kommercializacii dvukh vidov preparatov, LunaSoy® iLunasin XP®, osnovannykh na ehkstrakte lunazina, kotorye mozhno ispol'zovat' v funkcional'nykh produktakh pitanija i napitkakh.
V ehtom kontekste neobkhodimo otmetit', chto proizvodstvo biologicheski aktivnykh dobavok na osnove vydelennykh soevykh peptidov v Kitae perezhivaet na segodnjashnijj den' nastojashhijj bum. No iz-za togo, chto prakticheski vse proizvodstvo orientirovano na vnutrennijj rynok, potrebitel'skaja informacija i nauchnye publikacii na anglijjskom ili russkom jazykakh prakticheski nedostupny. Takzhe otsutstvujut tochnye svedenija o primenjaemykh tekhnologijakh (izvestno lish', chto v ikh osnove lezhit upravljaemyjj gidroliz), o biokhimicheskom sostave i chistote produktov. Izvestnymi proizvoditeljami preparatovpeptidov v Kitae javljajutsja kompanii, zanimajushhiesja proizvodstvom pishhevykh soevykh belkov, takie kak Harbin Ho-Tech Soybean Food Co Ltd, kompanija Guangzhou Hisoya Biological Science,Lynyi Shansong Bilogical Products Co.i drugie.
Neobkhodimo otmetit' postavlennyjj v SShA interesnyjj opyt po polucheniju biopolimerov putem obrazovanija kataliziruemykh transglutaminazojj svjazejj mezhdu molekulami syvorotochnogo belka moloka i globulinami soi. Nesmotrja na bol'shuju molekuljarnuju massu 200 tys. Da (issledovateli ne podvergali iskhodnye belki destrukcii) poluchennyjj biopolimer obladal novymi funkcional'nymi svojjstvami[26]. Vpolne ochevidno, chto primenenie podobnogo mekhanizma polimerizacii po otnosheniju k nanorazmernym strukturirovannym belkovym chasticam pozvolit sozdavat' veshhestva s novymi kharakteristikami.
Interes k tekhnologii strukturnojj modifikacii belkovykh soedinenijj soi svjazan s zhelaniem vedushhikh mirovykh proizvoditelejj kak uluchshit' funkcional'nye svojjstva vypuskaemykh imi pishhevykh belkov, tak i osushhestvit' vydelenie i vypusk v tovarnykh kolichestvakh opredelennykh tipov soevykh polipeptidov i peptidov s podtverzhdennymi mediko-biologicheskimi svojjstvami. Pri ehtom poslednjaja motivacija igraet znachitel'no bolee vazhnuju rol', poskol'ku rech' idet o fakticheskom perekhode proizvoditelejj iz sektora pishhevykh ingredientov (food ingredients) v farmakologicheskijj sektor, kharakterizujushhijjsja znachitel'no bol'shimi urovnjami sprosa i dobavlennojj stoimosti.
V silu ehtogo obstojatel'stva kolichestvo otkrytykh zarubezhnykh publikacijj po temam, otnosjashhimsja k nanostrukturnojj modifikacii soevykh belkov, ves'ma neveliko. Issledovanija nosjat, v osnovnom, korporativnyjj kharakter, ikh rezul'taty obnarodujutsja, v luchshem sluchae, chastichno i posle zavershenija kommercializacii novykh produktov.
V minuvshem 2009 godu byli obnarodovany predvaritel'nye rezul'taty provedennykh v SShA issledovanijj, pokazyvajushhie «iskljuchitel'nuju cennost' ispol'zovanija polipeptidov pri sozdanii nanostrukturnykh ob"ektov»[27]. Prinimaja vo vnimanie to obstojatel'stvo, chto polipeptidy soevogo belka v ramkakh imejushhikhsja tekhnologijj mogut proizvodit'sja v znachitel'nykh promyshlennykh ob"emakh, proizvodstvo sootvetstvujushhikh nanomaterialov bukval'no srazu zhe posle zavershenija NIOKR mozhet stat' massovym i ehkonomicheski ehffektivnym.
Takim obrazom, strukturnaja modifikacija belkov soi javljaetsja ehffektivnym metodom pri sozdanii veshhestv s novymi svojjstvami, shiroko vostrebovannykh v razlichnykh tekhnologijakh i sferakh chelovecheskojj dejatel'nosti.
Spisok istochnikov i literatury
- Soybean Meal Evaluation to 2020. Report prepared by LMC International Ltd. for USB, Dec. 2006.
- Tam zhe. Dopolnitel'no — http://www.lmc.co.uk/Expertise.aspx?Id=4, «Market opportunities for Soya Protein Concentrate»
- Gunther, R. C., J. Amer. Oil: Chem. Soc.56, 345 (cit. po: «Prakticheskoe rukovodstvo po pererabotke i ispol'zovaniju soi» pod red. Ehriksona D.,. M., 2002, S. 154)
- Sm., naprimer: Wu, Wei; Zhang, Caimeng; Hua, Yufei. Structural modification of soy protein by the lipid peroxidation product malondialdehyde. Journal of the Science of Food and Agriculture, Volume 89, Number 8, June 2009 , pp. 1416-1423.
- Niels C. Nielsen. Structure of Soy Proteins. In New Protein Foods, vol. 5, p. 27-63. Academic Press, Inc. 1985
- W. U, N. Hettiarachchy, M. Qi «Hydrophobicity, Solubility, and Emulsifying Properties of Soy Protein Peptides Preparated by Papain Modification and Ultrafiltration». J. Amer. Oil: Chem. Soc, vol.75 (1998), no.7
- Boon-Sean, S. Ichikawa and others. “Preparation of Protein-Stabilized b–Carotene Nanodispersions by Emulsification-Evaporation Method”. J. Amer. Oil: Chem. Soc, vol.84 (2007), p. 1053-1062
- K. Sato, K. Hashimoto. Bioactive peptides — large-scale preparation. American Oil Chemist Society.2007, vol. 18; NUMB 11, pages 756-760.
- V. M. Belikov , M. Ju. Gololobov. «Plasteiny. Poluchenie, svojjstva i ispol'zovanie v pitanii». Uspekhi khimii, 48, 1684 (1979).
- A. G. Shlejjkin i dr. «Primenenie transglutaminazy v pishhevykh tekhnologijaz». Izvestija SPbGUNiPT, №1, 2006, S.136.
- Gaponova L. V. Razrabotka tekhnologii proizvodstva novykh form belkovykh produktov iz semjan soi dlja ispol'zovanija v molochnojj promyshlennosti. Avtoreferat dis. Na soisk. Uchenojj stepeni kand. Tekhn. Nauk. Leningrad,1980 g. (DSP) S.11
- Protein Quality and the Effects of Processing. Edited by R. Dixon Phillips and John W. Finley. Marcel Dekker, Inc., 1989, p. 125
- Food Proteins. Edited by J. E. Kinsella, W. G. Soucie. AOCS, 1989. P. 32.
- T. Ligo. Soy Peptides: A new ingredient for aqua feed. Aqua Feeds: Formulation and Beyond. Vol. 1, issue 3, 2004, page 21
- A. P. Golikov i dr. «Svobodnoradikal'noe okislenie i serdechno-sosudistaja patologija: korrekcija antioksidantami». Lechashhijj vrach, №4, 2003
- Yin-Ching Chan, etc. Nanonized black soybean enhances immune response in senescence-accelerated mice. International Journal of Nanomedicine 2009:4 27-35
- Howard, P. A., M. F. Canpbell, and D. T. Zollinger,US Patent 4,234,620 (1980). (cit. po: «Prakticheskoe rukovodstvo po pererabotke i ispol'zovaniju soi» pod red. Ehriksona D.,. M., 2002, S.143)
- rabota vypolnena v NPO «Maslozhirprom» (g.Sankt-Peterburg), kotoryjj pozdnee byl pereimenovan v Vserossijjskijj nauchno-issledovatel'skijj institut zhirov RASKhN.
- S. N. Zorin i dr. «Poluchenie i kharakteristika fermentativnogo gidrolizata izoljata belkovykh belkov». Voprosy pitanija, tom75. M., 2006.
- A. G. Shlejjkin i dr. «Primenenie transglutamenazy v pishhevykh tekhnologijaz». Izvestija SPbGUNiPT, №1, 2006, S. 135-137.
- Donskojj N. S. i dr. «Gidroliz syvorotochnykh belkov kak nanobiotekhnologija». Materialy XXXVIII nauchno-tekhnicheskojj konferencii SevKavGTU za 2008 g., T. 1.
- R. Molin i dr. Belkovye gidrolizaty v pishhevykh produktakh. «Pishhevye ingredienty. Syr'e i dobavki». №2, 2005. S. 75
- Hyung J. Jeong, Jae H. Park, Yi Lam, and Ben O. de Lumen. Characterization of lunasin isolated from soybean. J Agric Food Chem. 2003 Dec 31;51(27):7901-6
- Elvira Gonzalez de Mejia, Miguel Vbsconez, Ben O. de Lumen, and Randall Nelson. Lunasin concentration in different soybean genotypes, commercial soyprotein, and isoflavone products. J Agric Food Chem. 2004 Sep 22;52(19):5882-7.
- De Mejia E. G.; Bradford T.; Hasler C. The anticarcinogenic potential of soybean lectin and lunasin. Nutr Rev. 2003 Jul;61(7):239-46.
- M. Yildrim, etc. Properties of Biopolymers from Cross-linking Whey Protein Isolate and Soyberan 11 S Globulin. Journal of Food Science, vol. 61, No 6, 1996. P. 1129.
- http://2009.igem.org/Modular_protein_nanostructures.html
© 2012 Centr strategicheskojj kon"junktury. 11.3.2012 g.